GFP绿色荧光蛋白的性能和GFP用于分子标记

2018-05-29 15:27:55 GFP 129

GFPgreen fluorescent protein的简写。是由下村修等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。GFP其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色荧光。

GFP荧光蛋白的性能:

GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强,特别在450~490nm蓝光波长下更稳定。GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。

中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。

GFP绿色荧光蛋白用于分子标记

作为一种新型的报告基因,GFP已在生物学的许多研究领域得到应用。利用绿色荧光蛋白独特的发光机制,可将GFP作为蛋白质标签(protein tagging),即利用DNA重组技术,将目的基因与GFP基因构成融合基因,转染合适的细胞进行表达,然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内活体观察。由于GFP相对较小,只有238个氨基酸,将其与其他蛋白融合后不影响自身的发光功能,利用GFP的这一特性已经加深了我们对细胞内一些过程的了解,如细胞分裂、染色体复制和分裂,发育和信号转导等。

1996年,Ehrdardt等人首次报道了利用GFP的特性研究细胞分化蛋白FtsZ的定位。研究显示FtsZ在细胞分裂位点形成了一个环状物,且至少有9种蛋白在细胞分裂中起重要作用,尽管对这些蛋白功能仍然不是很清楚,但是利用GFP融合蛋白已经搞清楚了它们聚合的顺序以及在蛋白定位中的一些特征。利用GFP来检测目标蛋白的定位已为我们提供了一种对细胞内的一些基本的生理过程进行更详尽观察的新方法。

GFP

GFP观察常见问题:

1.动物植物里面表达GFP如何观察和拍照?

首先要选择光线比较暗的环境,佩戴路阳LUV-90P观察眼罩,采用美国路阳荧光蛋白观察镜LUYOR-3260RB照射要观察的植株,GFP表达位置即可清晰呈现。

2.观察到的GFP表达位置如何拍照?

要拍照植物GFP表达的位置,首先要有一台单反相机,安装美国路阳LUV-520植物拍照滤镜,美国路阳LUV-520滤镜是62mm,如果您的单反相机镜头不是62mm,可在市场上购买滤镜安装转换卡,也可直接找美国路阳中国服务中心免费索取,用LUYOR-3260RB荧光蛋白观察镜照射植物,用装有LUV-520滤镜的单反相机直接拍照就行了,切记要关闭照相机闪光功能。

3.红色荧光蛋白如何观察和拍照?

首先要选择光线比较暗的环境,佩戴路阳LUV-50观察眼罩,采用美国路阳便携式荧光蛋白观察镜LUYOR-3260GR照射要观察的植株,GFP表达位置即可清晰呈现。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

4. 用LUYOR-3260RB便携式荧光蛋白观察镜需要把植物叶片采下来观察吗?

LUYOR-3260RB便携式荧光蛋白观察镜内置有充电电池,即开即用,可以直接带入到试验田里面观察, 无需采摘叶片,如果试验田光线太亮,需要做隔光处理。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

5. LUV-520拍照滤镜可以用于其他厂家的激发光源吗?

凡是能激发GFP荧光的荧光蛋白观察镜, LUV-520拍照滤镜均能够满足,可以单独购买LUV-520拍照滤镜。

荧光蛋白观察镜如何观察GFP定位?

6.  365nm、450nm、488nm 用哪个波段最好?

GFP和egfp用这几个波段都能激发出荧光,365nm激发的比较弱,488nm激发的荧光最强,但488nm的激发波长太接近发射波长520nm,激发光和发射光距离太近对观察眼镜要求太高,观察眼镜很难把发射光隔离掉,会严重干扰发射的荧光。所以用450nm的激发光是最理想的。

7.  365nm的紫外光源照射植物叶片为什么是红色和黄色?

365nm的紫外光源照射植物叶片,叶片的叶绿素在紫外线作用下会发红光,GFP发出的是绿色的荧光,红色和绿色混在一起,会变成黄色,所有,用紫外光源照射叶片上黄色部位有可能就是GFP表达的位置。

8.  为什么观察眼镜和拍照滤镜价格这么贵?

因为这种眼镜和滤镜的镜片对波段的截止要求特别高,不允有任何激发光通过,镜片表面经过了60多层涂层处理,制造工艺特别复杂。

9.  观察眼镜和拍照滤镜如何保养?

观察眼镜和拍照滤镜的镜片经过了60多层涂层处理,不用时请放置好,表面有灰尘请用柔软的镜头布蘸中性洗涤剂擦洗.

10. LUYOR-3260RB荧光蛋白观察镜主要有哪些应用?

1.检测转绿色荧光蛋白(GFP)基因、红色荧光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥等;
2.检测转GFP、DsRed基因动物:小鼠、兔子、猴子等;
3.检测转GFP、DsRed基因微生物:细菌、真菌、酵母等;
4.检测GFP、DsRed基因组织特异性表达

11.在哪里可以买到美国路阳的便携式荧光蛋白观察镜?

美国路阳在上海设立有中国客户服务中心,提供路阳产品的销售维修服务。上海、北京、郑州均可免费上门演示,美国路阳对中国地区的客户提供3年免费维修服务,中国地区免费咨询电话:4006-254-365

 

 

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